一、背景

戊型病毒性肝炎（简称戊肝）是由戊型肝炎病毒（HEV）引起的以肝脏炎症和肝功能损害为主要表现的传染病，其传播途径主要是粪-口传播，常引起暴发流行。戊肝临床病例主要见于青壮年和中老年人，在妊娠女性中的病死率高达10％～25％。山东省自1997年开始通过法定传染病报告系统报告戊肝病例，十几年来戊肝发病持续上升，报告发病率由1998年的0.13/10万上升到2013年的1.64/10万；烟台、威海、日照、济南、青岛等五市1997-2013年戊肝报告发病率居全省前5位，分别为4.19/10万、3.88/10万、2.25/10万、1.08/10万和1.04/10万；其中除济南市外，其余4市均为沿海地区。

为了解我省重点地区、重点人群戊肝流行状况，为戊肝防治策略提供依据，拟于近期在山东省开展大学生、慢性肝病患者、密切接触海产品的人员等重点人群血清学调查。现制定如下调查方案。

二、调查目的

掌握山东省大学生、密切接触海产品人员和慢性肝病患者三类重点人群戊肝病毒感染率和人群抗体水平，为制定戊肝控制特别是免疫策略提供参考。

三、调查对象

本次调查包括大学生、密切接触海产品人员和慢性肝病患者三类重点人群。

（一）抽样方法和调查对象的确定

1、大学生 以大中专院校一年级新生为调查对象。在山东省济南市（内陆城市）和烟台市（沿海城市）各选择1~2所综合大学，按照整群抽样原则，对其2014年9月入学新生进行调查。

2、密切接触海产品人员  以海产品加工工人为调查对象。在山东省烟台市随机选择若干所新鲜贝类海产品加工厂，按照整群抽样原则，对该厂所有直接接触新鲜贝类海产品工种的工人进行调查。

3、慢性乙肝感染者  以实验室确诊乙肝病毒表面抗原（HBsAg）阳性者为调查对象。在山东省两个乙肝示范区济南章丘市（内陆地区）和威海乳山市（沿海地区）开展调查。该项目对示范区强化干预乡镇常住人口进行HBsAg普查，并对HBsAg阳性者进行复查和随访，所有阳性者血清标本均在省疾控中心留存建立血清库。两个示范区各抽取其2~4个强化干预乡镇，按照整群抽样原则，对该乡镇所有项目查体HBsAg阳性者进行调查；同时随机抽取调查乡镇部分村，对其HBsAg阴性者进行调查。

（二）样本量计算

1、样本量  最小样本计算公式：，其中允许误差：。根据既往调查结果，：参考2006年全省病毒性肝炎血清学调查数据，山东省成人抗-HEV IgG抗体阳性率按照10%计算，允许误差（）控制在20%以内，实际取值为2%，变化范围为8%—12%，则需要样本量为864人，按10%失访率计算，样本量为950，实际按照1000人进行。

2、不同调查人群的样本量分布

（1）大学生人群：因为要对内地生源和沿海生源进行分层分析，故济南市和烟台市分别需调查1000人，即该人群实际调查2000人。

（2）密切接触海产品人员：实际调查人数为1000人。

（3）慢性乙肝感染者：因为要对沿海地区和内陆地区进行分层分析，同时要与非慢性乙肝感染者进行对比，故济南章丘市和威海乳山市分别需调查2000人（HBsAg阳性、阴性各1000人），即该人群实际调查4000人。

综上，本调查共需调查对象7000人。

四、调查内容与方法

（一）问卷调查

对所有调查研究对象发放知情同意书（附件1），由经过培训的县级疾控机构人员对所有知情同意者进行调查，调查内容包括一般情况，生活史，流行病学史，接触史等，填写调查表（附件2）。每名调查对象按照统一的编码原则确定其条形码编号，每名调查对象条形码一式六联，将其中两联粘贴于知情同意书和调查表相应位置。

（二）标本采集和处理

大学生人群和密切接触海产品人员血标本通过现场采集获得，慢性乙肝感染者血标本从山东省疾控中心乙肝示范区血清库留存标本中获得。

1、大学生和密切接触海产品人员：由经过培训的县级疾控机构人员，在进行调查的同时对每名调查对象采集血标本5ml，填写标本登记表（附件3），送县级疾控中心进行血清分离，血清标本冷冻后连同标本登记表一起送省疾控中心待检。同一调查对象采血管、标本登记表及血清管上应粘贴与其调查表编码一致的条形码。

2、慢性乙肝感染者：由省疾控中心人员从其血清库中将保留的调查对象血清标本取出，该标本均保存在-40℃血清库中；直接送检测机构检测。

（三）标本检测

委托有资质的独立医学实验室采用ELISA方法统一检测抗-HEV IgM和抗-HEV IgG。

五、调查数据的录入和分析

本次调查采用Epidata 3.1软件建立调查数据库，由省疾控中心下发录入程序，经过统一培训的数据管理人员严格按照双录入的要求统一录入；数据录入由县级疾控中心和省级疾控中心相关人员分别完成。市疾控中心负责将辖区各县数据库核对校验无误后统一上传至省疾控中心肝炎邮箱：sdepigy@163.com。省疾控中心进行数据处理，完成数据分析和撰写报告。

六、质量控制

国家、省、市疾控中心成立血清学调查流行病学和实验室专家组，负责对调查人员的培训和技术指导。

（一）各市按照方案要求，将采取的标本及时进行血清分离，分装，并粘贴条形码，确保采血管、血清管条形码和调查问卷条形码完全一致。

（二）调查后将个案调查表统一进行数据录入，所有调查问卷均采取双录入，对录入的数据进行核对和逻辑检查。对有错误的和缺失的数据，要及时与调查人员联系查明，并及时填补。完成双录入后，整理上报数据库。

（三）实验室质量控制：

1．采血管、血清管、调查表等均由项目组统一采购（印制）下发；

2. 下发统一的实验室操作流程及条形码，保证采血、血清分离、编码、运送符合实验室要求。详见附件4。

3．试剂选择。中国疾病预防控制中心负责试剂的评价和选取，确保检测试剂的质量。

（四）数据分析由专业统计人员和业务人员共同完成，保证分析准确无误。

七、进度安排 

2014年9月上旬  完成研究方案制定、伦理学许可和方案下发；完成人员培训、耗材采购和下发等前期准备工作。

2014年9月中旬  完成大学生人群现场调查和标本采集；

2014年9月下旬   完成大学生人群标本检测；

2014年10月      完成慢性乙肝感染者和密切接触海产品人群现场调查和标本采集；

2014年11月-12月完成慢性乙肝感染者和密切接触海产品人群标本检测；

2015年3月底前   完成血清学调查数据分析和总结撰写。

附件：     

1．山东省重点人群戊型肝炎血清学调查知情同意书

2．山东省重点人群戊型肝炎血清学调查调查表

2-1山东省重点人群戊型肝炎血清学调查调查表（大学生用）

2-2山东省重点人群戊型肝炎血清学调查调查表（海产品加工人员用）

2-3山东省重点人群戊型肝炎血清学调查调查表（慢性肝病病人用）

3．山东省重点人群戊型肝炎血清学调查标本送检表

4．山东省重点人群戊型肝炎血清学调查标本采集、运输和保管要求

4-1条形码使用方法

附件4      血标本采集、运输和保管要求

一、采集现场

（一）采集前准备：

1. 采集消毒耗材：碘伏，棉球，采血用器（真空采血管、采血针、肘垫、橡皮带），镊子，一次性手套，废弃物回收盒，标本采集登记表。

2. 检查器械：认真检查真空采血管、采血针的包装是否完好，同时查看采血针是否锋利等，若采血管包装有破损或针头不锋利，一律抛弃。

3. 了解被采血对象的状况：清晨空腹采血，若被采血对象有呕吐、发热、腹泻等不良症状，不要急于采血，待上述症状明显好转或康复后再采集静脉血。

4. 工作人员安全：采血人员一定要戴好一次性手套，若在操作期间手套破损，应立即更换手套，方可进行操作。

（二）采集过程

1. 采血部位：主要为肘部。

2. 消毒：分两步消毒，首先用碘伏进行消毒，消毒时应遵循先里后外的原则进行消毒，以采血点为中心，螺旋式由内向外消毒；然后用酒精棉球以同样的方式进行采血部位的消毒。

3.采血：将蝶翼采血针的一端刺入静脉，另一端插入真空采血管，血液在负压作用下自动流入采血管。

4. 压迫止血：拔出采血针，用干净的棉球压迫止血。

5. 标本放置：将采集静脉血的真空采血管放置在采血架上，由采血员从条码纸上按顺序揭下一张条形码，粘贴在真空采血管上，同时再揭下同一编号的另两张条码，粘贴在“个案调查表”的右上角和“山东省戊型病毒性肝炎血清流行病学标本送检表”（简称“标本送检单”）条形码号栏，并记录基本信息。条形码的使用方法见附4-1。

6. 安全注射：所有使用的废弃物品，包括酒精棉球、碘酒棉球、采血针和一次性手套等，统一回收，或高压消毒后销毁或深埋。

（三）采集后处理

1. 观察：标本采集后，对被采血对象观察15～20分钟。

2. 核实：核实“个案调查表”及“标本送检单”与采血管编码是否一致。

（四）运送：采血管和“样品送检单”一并送往实验室。注意避免摇晃、颠倒，冷冻。

二、血清分离和分装

（一）实验室准备

1．准备器材：1毫升移液器及相关枪头若干（或一次性塑料吸管），血清管、血清架及塑料血清盒（100孔）。

2. 离心机和冰箱：若干台。

（二）分离血清

1．血清分离前，将全血标本在常温下放置3～5小时，使其充分凝集，要尽可能在采集后12小时内分离血清。

2．在实验室将采血管于1500～2500转/分钟离心10～15分钟。

3．使用1毫升移液器（或一次性塑料吸管）吸取尽可能多的血清，应避免吸入血球，粘贴与真空采血管同一编号的条形码。每个血清管各粘贴一张。

4. 将血清管按其编号从左至右放入血清盒中，-20℃保存。连同标本送检单一起送检。

附件4-1              条形码使用方法

一、条形码的编码原则

本次使用的条形码为12位数编码，编码原则第1位代表调查对象类型，其中“1”表示慢性乙肝感染者；“2”表示慢性乙肝感染者的健康对照，“3”表示大学生，“4”表示密切接触海产品人员；2～5位为研究现场所在市国标编码；第6～9位为顺序码，第10~12位为HEV。本条形码为一式六联。

二、条形码使用方法

（一）使用标本条形码是为了确保每例调查对象的知情同意书、调查问卷、采血管、血清管之间编码的一致性、唯一性；

（二）条形码一式六联，分别粘贴于知情同意书、调查问卷、采血管、血清管和送检表上，另一联备用。

（三）条码应按采血管的纵轴方向进行粘贴，绝对不可环形粘贴，否则会影响读码器的识别；

（四）粘贴条码应注意整洁和牢固，防止血迹、污物等污染条码。